水生生物毒性试验是按等比设置一系列供试物的水溶液，引入试验生物，观察，统计死亡/抑制数，计算LC₅₀/EC₅₀，审查要点如下：

•浓度设置: 根据预试验确定的剂量范围，试验按等比例间距设置5～7个浓度组，鱼、溞几何级差应控制在2.2倍以内，藻几何级差控制在3.2倍以内。

•限度试验：限度试验设置上限浓度为100 mg a. i./L，若供试物溶解度小于100 mg a.i./L，则采用其最大溶解度作为上限浓度。试验生物在供试物浓度达上限浓度时死亡率（抑制率）为0（溞抑制率不超过10%），则无需继续试验，否则，应当继续试验，以得到LC₅₀/EC₅₀。

难溶于水的可用少量毒性小的有机溶剂助溶，有机溶剂用量一般不得超过0.1mL（g）/L。

•试验条件（鱼）：试验溶液的溶解氧含量应不低于空气饱和值的60%。静态试验法和半静态试验法的最大承载量为每升水1.0 g鱼体重（1.0 g鱼/L）。每组至少5尾鱼。

试验条件（溞）：试验期间水质应保持稳定，满足pH为6.0～9.0，溶解氧≥3.0 mg/L。对大型溞的水质硬度（以CaCO₃计）为140 mg/L～250 mg/L，对于其它溞类可适当降低水质硬度。试验水温18℃～22℃，同一试验中，温度变化应控制在±1℃之内；光照周期（光暗比）为16 h : 8 h，或全黑暗条件（尤其对光不稳定的供试物）。

试验条件（藻）：试验环境温度21℃～24 ℃（单次试验温度控制在±2℃）；连续均匀光照，光照强度差异应保持在±15%范围内，光强4440 Lx～8880 Lx。

•参比物质（鱼）：重铬酸钾（每批1次或者至少1年两次），对于斑马鱼LC₅₀（24 h）应处于200 mg/L～400 mg/L之间。。

参比物质（溞）：重铬酸钾，对于大型溞EC₅₀（24 h）应处于0.6mg/L～2.1 mg/L之间。

参比物质（藻）：参比物质推荐使用3、5-二氯苯酚和重铬酸钾。

•应测定供试物在试验溶液中的浓度，混配制剂应同时测定每个有效成分的含量。报告中应包括样品前处理方法、仪器条件、线性范围、添加回收率、相对标准偏差、最低定量浓度（LOQ），空白、标样和样品的典型谱图。需要注意的是2014年新试验准则发布后的试验报告均需要提供分析方法测定报告。

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