方法确认报告主要检测方法的特异性、精密度、准确度、线性关系以及非分析物干扰，其原始记录主要涉及到称样量与原始谱图。

一、特异性

①HPLC-DAD：一般为时间、响应信号、波长三者组成的三维谱图，检测的是制剂样品在待测组分对应的保留时间下，对应的最大吸收波长以及峰纯度因子。体现在方法确认报告中一般为三个二维谱图：①吸收信号——保留时间谱图：即一般的液相色谱图；②吸收信号——波长谱图：即全波长扫描谱图，可确定待测组分在该波长下是否有较强的吸收信号。③相似曲线谱图——计算峰纯度因子。一般情况下，待测组分在所选分析方法下在该波长处有较强的吸收信号、色谱峰纯度因子＞970，即可认为特异性合格。如下图所示。

②HPLC-MS或GC-MS：由于物质的质谱图是独一无二的，因此该方法一般是通过比较待测组分标样的质谱图与制剂在其对应保留时间下主峰起始点、保留时间点、峰尾结束点三者的质谱图，比较其特征分子离子峰数量和高低与标样是否一致，以基本一致判定为特异性合格。

注：

①特异性一般涉及到的是色谱法，对于化学滴定法、吸光光度法等其他方法，一般不需要进行相关特异性描述。

②混配制剂，应该每个有效成分都有其对应的特异性谱图。不同分析方法，也应该有不同的特异性谱图。

二、精密度

对同一样品进行质量分数的五次重复测定，按照标1-1、试1-1、试1-2、标1-2、试2-1、试2-2...的方法进样获得原始谱图，五次重复测定一般为16张谱图。

在方法确认报告中，精密度建议体现以下数据：①标样质量分数和标样称样量；②试样称样量；③每个点的峰面积（内标法还需体现峰面积与内标物之比）；④五次质量分数测定结果以及平均值、标准偏差、相对标准偏差和Horwitz公式计算值。一般以相对标准偏差低于Horwitz公式计算值为精密度合格。

注：

①Horwitz公式计算时采用的质量分数以小数表示，即质量分数为20%时，需代入0.2进行计算。

②对于混配制剂多个有效成分在同一分析方法下一起出峰的，理论上其五次称量的样品量为相同的样品量。

三、准确度

一般通过添加回收率表示。需配制多个与待测组分含量测定时相同的实验室制样品分别进行回收率测定。按照标1-1、试1-1、试1-2、标1-2、试2-1、试2-2...的方法进样获得原始谱图，四次重复测定一般为13张谱图。

有效成分测定一般采取空白加标法测定，至少配制4份实验室制样品。杂质一般采取样品取样量减半（1:1比例加入标准品配制5份或0.8:1、1:1、1.2:1每种比例各配制两份总计6份）配制实验室制样品。

在方法确认报告中，准确度建议可以体现以下数据：①标准品折纯后的加入量（标准品称样量×标准品质量分数）；②实验室制样品中添加的标准品折纯后的加入量（杂质测定时配制的实验室制样品建议样品和标准品折纯后的加入量一同体现）；③每个点的峰面积（内标法还需体现峰面积与内标物之比）；④检出量和回收率及回收率平均值。以回收率满足《NY/T 2887-2016》中相关要求为合格。

注：

①回收率测定结果应满足《NY/T 2887-2016》中相关要求。

②对于存在稀释倍数的方法，建议对样品的配制和稀释过程进行相关描述。

四、线性关系

一般通过标样折纯后的质量浓度与峰面积的线性关系（内标法为标样折纯后的质量和内标物的质量比与标样峰面积和内标物峰面积之比的线性关系）体现。至少应涵盖该组分测定浓度（内标法为质量比）的±20%。一般为三个浓度2次重复或者5个浓度1次重复进行测定。以相关系数＞0.99为合格。

在方法确认报告中，线性关系建议可以体现以下数据：①质量浓度（内标法为质量比）和峰面积（内标法还建议体现峰面积之比）；②线性方程和相关系数。

注：

①线性范围应包含实际测定时的质量浓度（内标法为质量比）以及其±20%。

②相关系数应＞0.99。

③对于微生物毒力测定时的毒力回归曲线以及吸光光度法测定时的工作曲线等，需要在方法确认报告中体现。

五、非分析物干扰

外标法一般通过不带助剂的原药和不带原药的助剂，与试样的色谱图进行对比进行体现。内标法建议提供不带助剂的原药和不带原药的助剂、以及内标物色谱图、原药+内标色谱图、试样色谱图，与试样+内标色谱图进行对比。以非分析物对待测组分构不成干扰为合格。