1.当供试物为原药，以水中溶解度上限作为试验浓度时，若死亡率（或抑制率）＜50%，可否直接判定LC₅₀（或EC₅₀）＞该溶解度上限？还是应通过其他方式，例如添加有机溶剂助溶，以求得确切的毒性端点值？

当供试物在水中溶解性较差时，预试验阶段应安排饱和溶解度探索性试验，以确定试验条件下供试物在试验体系中可达到的最大溶解度。为了增大供试物在试验液中的溶解，可采取超声、搅拌、振荡、加助溶剂等措施。具体方法可参考OECD GD 23和OCSPP 850.1000相关指导文件。当使用助溶剂对提高水中溶解度作用不大时，优先使用直接溶解法。当供试物在饱和状态下未表现出急性毒性时，即最大溶解度下死亡率(或抑制率)＜50%时，可以“LC₅₀(或EC₅₀)＞该试验浓度上限”作为试验结果。试验报告中应详细描述饱和试验液制备方法(含前期对试验液制备的探索性试验过程)，提供供试物的水溶解度，并对饱和溶液进行评估。

2.是否所有试验液均应进行离心或过膜处理以获得真溶液?

真溶液是指由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质以分子或更小的质点分散于另一物质中。水生生物试验中，应将供试物配制成均一和稳定的溶液、悬浮液或乳状液开展试验，不应片面追求“真溶液(尤其是当供试物为混配制剂时)。以下情况可以将受试生物直接暴露于试验液中开展试验:①不经过膜/离心处理，试验液呈现均匀、分散状态时；②试验液中存在微量不溶物，但预试验结果表明不溶物不会对试验生物产生物理性损伤/致死等作用的。但应注意，采用上述试验液直接染毒的情况下，应在有效成分浓度检测过程中采取相应措施，将水样进行离心/过膜处理获得真溶液后再进行后续的前处理操作。

3.对于有效成分溶解度相差较大的混配制剂，应如何制备试验液?

开展混配制剂毒性试验时，应优先考虑直接将储备液稀释到试验浓度，配制成悬浮液或乳状液，再根据实际情况判断是否需要在暴露前对试验液用分液漏斗、虹吸、离心、过膜等方式去除悬浮物。不宜采用将储备液过膜/离心后稀释的方法配制试验液，该方法易导致试验液中各有效成分的配比较其制剂产品中的配比发生很大变化。

4.难溶性原药配制试验液时，如需使用助溶剂，对助溶剂种类有何要求？用量是否必须≤0.1g(mL) /L？在溶剂对照组受试生物表现正常的前提下能否大幅增加助溶剂用量？

试验液配制过程中应尽量避免和减少助溶剂的使用。确需使用时，应满足以下条件:①只能使用低毒助溶剂，如丙酮、乙醇、甲醇、叔丁醇、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和三甘醇等；②助溶剂含量应≤100 mg/L或0.1mL/L，且各个处理组及溶剂对照组中助溶剂的含量应一致；③采用助溶剂助溶时，助溶剂用量不应超出准则要求。

节选自《农药登记环境影响试验常见问题解答》​